Помозите развоју веб локације, дељење чланка са пријатељима!

ПЦР је тест који се користи у дијагностици многих болести. ПЦР метода омогућава да се покаже директно присуство бактерија у организму, а посебно њене ДНК. ПЦР се користи, између осталог, у у дијагнози Лајмске болести. Шта је ПЦР техника? Шта је ПЦР у реалном времену?

Садржај:

  1. ПЦР (тест) - шта је ПЦР техника?
  2. ПЦР (тест) - примена ПЦР методе
  3. ПЦР (тест) - Лајмска болест
  4. ПЦР (тест) - резултати. Могу ли бити лажно позитивни?
  5. ПЦР (тест) - резултати. Могу ли бити лажно негативни

ПЦР(ланчана реакција полимеразе) је примарни метод који се користи у генетским и молекуларним лабораторијама. Развила га је 1983. Кара Мулис, која је за то добила Нобелову награду 1993.

ПЦР (тест) - шта је ПЦР техника?

ПЦР тестсе састоји у вишеструкој амплификацији (обично у 30-40 циклуса) специфичног фрагмента ДНК, нпр. гена који кодирају протеине Боррелиа, уз употребу ензима полимеразе.

Затим, да би се визуелизовао амплификовани фрагмент ДНК, користе се специјалне молекуларне боје. ПЦР, захваљујући амплификацији специфичних ДНК фрагмената, је ултра-осетљива метода.

У ПЦР методи, фрагменти ДНК се амплифицирају коришћењем специфичних парова прајмера за дати регион бактеријске ДНК. На пример, ПЦР циљни региони који се користе у дијагнози Лајмске болести су гени који кодирају протеине, нпр. 16С рДНА, рецА, фла, п66, ОспА.

Биолошки материјал из којег се може извршити тест је:

  • крв
  • део коже од мигрирајућег еритема
  • цереброспинална течност
  • синовијална или хрскавична течност
  • урин

ПЦР (тест) - примена ПЦР методе

Поред дијагнозе Лајмске борелиозе, ПЦР метода може открити специфичне фрагменте ДНК других микроорганизама или људи. Стога се ПЦР метода такође користи у:

  • дијагностика и праћење вирусних инфекција: херпес вируси (херпес вирус, херпес зостер, Епстеин-Барр, цитомегаловирус), ХИВ, вируси хепатитиса (ХБВ и ХЦВ)
  • дијагностика и праћење бактеријских инфекција, посебно оних бактерија,који се не могу идентификовати кроз културе, нпр. туберкулоза
  • дијагностика и праћење неопластичних болести: леукемија, рак дојке, колоректални канцер, рак плућа
  • дијагноза предиспозиције за рак: рак дојке и јајника (БРЦА1 и БРЦА2 гени), колоректални канцер (АПЦ и ЦХЕК2 гени)
  • дијагноза генетских болести: хемохроматоза (ХФЕ ген), таласемија (ХБА1 и ХБА2 гени), целијакија (ХЛА гени)
  • тестови очинства, који откривају компатибилност ДНК детета и оца
Вреди знати

Тренутно постоји много модификација ПЦР методе. На пример, у дијагнози Лајмске болести углавном се користе методе угњежђеног ПЦР-а (угнијежђеног ПЦР-а) и ПЦР-а у реалном времену ( ). Ово последње је квантитативна метода и омогућава да се одреди тачан број копија ДНК борелије у тестираном биолошком материјалу.

ПЦР (тест) и лајмска болест

Основа за дијагнозу лајмске болести је серолошко тестирање. Међутим, постоје клиничке ситуације које могу довести до тога да ови тестови буду лажно негативни:

  • серолошки прозор, односно почетни период инфекције у којем тело још не производи специфична ИгМ и ИгГ антитела против борелије
  • код имунокомпромитованих људи који не производе довољно антитела
  • присуство имунских комплекса који се састоје од антигена борелије и специфичних антитела за њих и спречавају откривање антитела серолошким методама

Ако се сумња да пацијент има симптоме лајмске болести, а резултати серолошких тестова су негативни, може се извршити молекуларни тест заснован на ПЦР методи.

ДНК Боррелиа спирохета може се открити у раним стадијумима инфекције, пошто је број спирохета у телесним течностима тада највећи.

У дијагнози Лајмске борелиозе, серолошке методе као што је ЕЛИСА се првенствено користе, али у неким клиничким ситуацијама генетско тестирање помоћу ПЦР методе је од помоћи.

Што је дуже време од инфекције, мања је вероватноћа откривања бактеријске ДНК. Због тога, у неким случајевима, пре него што се уради ПЦР тест, бактерије се узгајају на посебним подлогама 1-2 недеље, а затим се врши тест.

Овај приступ се користи у случају сумње на лајмску болест и узету цереброспиналну течност. У касној фази инфекције, прикладније је урадити ЕЛИСА тест.

ПЦР метод не би требало да се користи у рутинској дијагнози лајмске болести због недостатка стандардизацијеу вези са појавом сорти Боррелиа бургдорфери у Пољској.

Међутим, у случају потешкоћа у дијагностици (нарочито у раној фази болести), резултат ПЦР теста је од помоћи у дијагностичком процесу.

Позитиван резултат теста значи да је у тестираном материјалу откривено присуство ДНК Боррелиа бургдорфери и његових варијанти, али не објашњава да ли је организам активно заражен. С друге стране, негативан резултат не искључује присуство бактерија у телу.

Неке лабораторије нуде тестирање на присуство борелије ДНК у крпељу. Међутим, резултат таквог теста није основа за дијагнозу лајмске болести код угризене особе.

ПЦР - резултати. Могу ли бити лажно позитивни?

ПЦР је ултра-осетљива метода и у исто време веома осетљива на контаминацију. Због тога је веома важно у тестирању заснованом на ПЦР-у одабрати одговарајућу интерну контролу како би се искључили лажно позитивни резултати.

Правилно прикупљање материјала за тестове, као и искуство и поузданост дијагностичара који обавља тест су такође од кључне важности.

ПЦР - резултати. Могу ли бити лажно негативни

Као иу сваком лабораторијском тесту, такође иу ПЦР методи, могу се појавити лажно негативни резултати. Овде је кључно прикупити крв за одговарајући антикоагуланс, јер неки од њих, као што је хепарин, могу инхибирати ПЦР реакцију.

Сакупљање материјала након почетка терапије антибиотицима може смањити ефикасност ПЦР реакције и повећати вероватноћу лажно негативних резултата.

Такође треба имати на уму да бактерије борелије живе веома кратко у крви и телесним течностима, јер захваљујући посебним рецепторима веома брзо продиру у „тешко доступна” места у телу.

Дакле, за разлику од дијагностике других микроорганизама, број Боррелиа спирохета у биолошком материјалу је мали, понекад чак и на граници детекције ПЦР методе. Ово такође може изазвати лажно негативан резултат.

Референце

  1. Дунај Ј. ет ал Значај ПЦР методе у дијагностици лајмске борелиозе. Прегледај Епидемиол. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Лабораторијска дијагностика болести које преносе крпељи Препоруке Радне групе: Национална комора лабораторијских дијагностичара, Национални институт за јавно здравље-Национални институт за хигијену, Национални консултант у области заразних болести, Одељење за инфективне болести и неуроинфекције , Медицински универзитет у Бјалистоку, Пољско друштво за вирусологију, Варшава 2014.
  3. Ружић-Сабљић Е. и Церар Т. Напредак у молекуларној дијагностици лајмске болести. Екперт Рев Мол Диаг. 2022Јан; 17 (1): 19-30
  4. Валонес М.А.А. ет ал Принципи и примена полимеразне ланчане реакције у медицинским дијагностичким областима: преглед. Браз Ј Мицробиол. Јан-Мар 2009; 40 (1): 1-11
О ауторудр Каролина Карабин, молекуларни биолог, лабораторијски дијагностичар, Цамбридге Диагностицс ПолскаПо струци биолог, специјализант микробиологије, и лабораторијски дијагностичар са преко 10 година искуства у лабораторијском раду. Дипломирао је на Колеџу за молекуларну медицину и члан Пољског друштва за хуману генетику. Шеф истраживачких грантова у Лабораторији за молекуларну дијагностику на Одсеку за хематологију, онкологију и унутрашње болести Медицинског универзитета у Варшави. Одбранила је звање доктора медицинских наука из области медицинске биологије на 1. Медицинском факултету Медицинског универзитета у Варшави. Аутор многих научних и научнопопуларних радова из области лабораторијске дијагностике, молекуларне биологије и исхране. Свакодневно, као специјалиста из области лабораторијске дијагностике, води одељење садржаја у Цамбридге Диагностицс Полска и сарађује са тимом нутрициониста на ЦД Диетари Цлиниц. Своја практична знања о дијагностици и дијеталној терапији болести дели са специјалистима на конференцијама, тренинзима, у часописима и веб страницама. Посебно је заинтересована за утицај савременог начина живота на молекуларне процесе у телу.

Помозите развоју веб локације, дељење чланка са пријатељима!

Категорија:

Истраживање